Plásmido Doble Nickase (h) Cks1: sc-403019-NIC

El CKS1B humano codifica Cks1, una subunidad reguladora conservada de las quinasas dependientes de ciclina (CDK) que acopla los complejos CDK a la actividad de la ligasa E3 de ubiquitina SCF^SKP2 y favorece transiciones oportunas del ciclo celular. Al facilitar la ubiquitinación y el recambio de inhibidores de CDK como p27^Kip1, Cks1 ayuda a coordinar la progresión G1/S, la competencia para la replicación del ADN y la recuperación de los puntos de control bajo señales proliferativas. La expresión desregulada de CKS1B se asocia con frecuencia con una proteostasis alterada y programas de proliferación aberrantes, lo que la hace relevante para estudios del control oncogénico del ciclo celular y la estabilidad del genoma. Como resultado, Cks1 se analiza habitualmente en vías que vinculan la señalización de CDK, la degradación mediada por ubiquitina y las respuestas al estrés replicativo.

Cks1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CKS1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CKS1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CKS1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CKS1B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.