Plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-1 (m): sc-419701

Présentation

Ccr1 code le récepteur aux chimiokines CKR‑1 (CCR1), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à des chimiokines CC inflammatoires afin de contrôler la chimiotaxie, l’adhésion et l’infiltration tissulaire des leucocytes. La signalisation via CKR‑1 mobilise des protéines G hétérotrimériques pour activer les flux de calcium, les cascades MAPK/ERK et des voies dépendantes de PI3K, qui coordonnent le remodelage du cytosquelette et la migration directionnelle. Dans les compartiments immunitaires murins, Ccr1 contribue au trafic des monocytes/macrophages et des neutrophiles et façonne des circuits inflammatoires pilotés par les cytokines. Une activité CCR1 dérégulée a été associée à des modèles de pathologies inflammatoires et de type auto-immun, et a été étudiée dans des contextes incluant l’infection, la fibrose et le recrutement myéloïde associé aux tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccr1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccr1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CKR-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccr1 pour l'étude de la signalisation de CKR-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccr1 essentiels à la fonction de CKR-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccr1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CKR-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CKR-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccr1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CKR-1 plasmide HDR (m) et le CKR-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccr1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccr1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.