Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cingulin Double Nickase Plasmid (h): sc-404409-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cingulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cingulin Double-Nickase-Plasmid (h) und Cingulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CGN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cingulin: sc-365264
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cingulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-404409-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cingulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404409-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CGN kodiert Cingulin, ein zytoplasmatisches Gerüstprotein, das an Tight Junctions konzentriert ist und dort transmembrane Junction-Komponenten mit dem kortikalen Aktin-Zytoskelett verbindet. Cingulin koordiniert die Ausbildung und Aufrechterhaltung epithelialer Barrieren, indem es den Aufbau von Zellkontakten, die Zellpolarität und die Organisation des Zytoskeletts moduliert, und es ist in Signalwege eingebunden, die die junctionale Spannung sowie die Aktivität von Rho-Familien-GTPasen regulieren. Über diese Funktionen beeinflusst CGN die parazelluläre Permeabilität und die Gewebehomöostase in polarisierten Epithelien und Endothelien. Eine veränderte Tight-Junction-Architektur und cingulin-assoziierte regulatorische Netzwerke werden häufig im Kontext von Barrierefunktionsstörungen, Entzündungen und epithelialem Remodeling untersucht, die für komplexe Krankheitsphänotypen relevant sind.
Cingulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CGN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CGN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CGN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CGN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.