Plásmido CRISPR de Activación (m) CIITA: sc-419390-ACT

El gen **Ciita** de ratón codifica **CIITA**, un coactivador maestro de la transcripción indispensable para la expresión de genes del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II (MHC II) y para la presentación de antígenos en células presentadoras de antígeno profesionales. CIITA integra señales de interferón‑γ y otras señales inmunitarias para coordinar programas transcripcionales que moldean la activación de la inmunidad adaptativa, el cebado de células T y las respuestas inflamatorias. La actividad alterada de CIITA afecta la regulación de la vía de MHC II y se estudia con frecuencia en contextos de desregulación inmunitaria, interacciones huésped‑patógeno y remodelación del microambiente tumoral‑inmunitario. Como nodo central en la presentación de antígenos, CIITA ofrece un punto de entrada funcional para desentrañar el control transcripcional de redes génicas inmunitarias.

CIITA El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ciita sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CIITA El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ciita en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ciita, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CIITA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ciita y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CIITA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CIITA en células tumorales con expresión de Ciita silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.