Plasmide CRISPR d'Activation (h) CIDE-B: sc-403808-ACT

Le gène humain **CIDEB** code la protéine **CIDE-B**, un membre de la famille CIDE impliqué dans la biologie des gouttelettes lipidiques, la gestion des lipides hépatocellulaires et l’homéostasie métabolique. CIDE-B se localise aux membranes associées aux gouttelettes lipidiques et a été reliée à des processus coordonnant le stockage des triglycérides, l’équilibre de la lipolyse et le métabolisme énergétique dans des contextes pertinents pour le foie et le tissu adipeux. Une expression altérée de **CIDEB** a été rapportée dans des études portant sur la dyslipidémie, la stéatose hépatique et des phénotypes plus larges de maladies métaboliques, où des modifications de la dynamique des gouttelettes lipidiques peuvent influencer la sensibilité à l’insuline et la signalisation inflammatoire. En tant que nœud mécanistique reliant les voies de stockage lipidique aux réponses au stress cellulaire, **CIDEB** est fréquemment évalué dans des modèles de remodelage métabolique et d’accumulation lipidique spécifique d’organe.

CIDE-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CIDEB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CIDE-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CIDEB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CIDEB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CIDE-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CIDEB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CIDE-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CIDE-B dans les cellules tumorales présentant une expression de CIDEB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.