CIB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405501-ACT

Humanes CIB1 (Calcium- und Integrin-bindendes Protein 1) kodiert CIB, einen myristoylierten EF-Hand-Calciumbinde-Regulator, der Ca²⁺-Signale mit integrinabhängiger Adhäsion und Zytoskelett-Remodelling koppelt. CIB1 ist an Signalnetzwerken beteiligt, die die Dynamik fokaler Adhäsionen, Reaktionen von Thrombozyten und Endothelzellen sowie stressadaptive, mit Zellüberleben und Migration verknüpfte Signalwege beeinflussen. Über Interaktionen mit den zytoplasmatischen Schwänzen von Integrinen und anderen Signalproteinen kann CIB1 die Kinaseaktivität und nachgeschaltete transkriptionelle Programme modulieren, die Proliferation und Motilität beeinflussen. Eine dysregulierte CIB1-Expression oder -Signalgebung wurde in Zusammenhängen beschrieben, die für die Gefäßbiologie, thrombosebezogene Mechanismen sowie krebsassoziierte Invasion und Metastasierung relevant sind, was seine Nutzung als mechanistisches Ziel in Pathway-Studien unterstützt.

CIB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CIB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CIB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CIB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CIB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CIB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CIB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CIB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CIB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CIB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.