Plásmido CRISPR de Activación (h) CHTOP: sc-411874-ACT

CHTOP (diana de la cromatina de PRMT1) codifica una proteína nuclear de unión a ARN que actúa como cofactor en la biogénesis y exportación del ARNm, integrando eventos asociados a la cromatina con la regulación génica postranscripcional. Participa en la vía TREX de exportación de ARNm y acopla la salida transcripcional a una exportación nuclear eficiente mediante interacciones con la maquinaria de procesamiento y transporte de ARN. CHTOP también se vincula a una regulación dependiente de la metilación de arginina e influye en el empalme alternativo, el ensamblaje de ribonucleoproteínas y programas de expresión a escala genómica. La actividad desregulada de CHTOP se ha asociado con alteraciones del metabolismo del ARN y estados de señalización proliferativa relevantes para la biología del cáncer y otras enfermedades caracterizadas por un control alterado de la expresión génica.

CHTOP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHTOP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CHTOP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHTOP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHTOP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CHTOP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHTOP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CHTOP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CHTOP en células tumorales con expresión de CHTOP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.