CHD8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426734

Übersicht

Chd8 kodiert das Chromodomain-Helikase-DNA-bindende Protein 8 (CHD8), einen ATP-abhängigen Chromatin-Remodeller, der während der Entwicklung die Positionierung von Nukleosomen und transkriptionelle Programme reguliert. CHD8 beeinflusst die Zugänglichkeit von Enhancern und Promotoren und verknüpft damit die Chromatinarchitektur mit der Zellzykluskontrolle, der neuronalen Differenzierung und Wnt/β-Catenin-assoziierten transkriptionellen Outputs. In Mausmodellen wird Chd8 häufig genutzt, um Mechanismen der Neuroentwicklung und genregulatorische Netzwerke zu untersuchen, da Veränderungen der CHD8-Dosierung in genetischen und funktionellen Studien mit der Biologie von Autismus-Spektrum-Störungen in Verbindung gebracht wurden. Diese Eigenschaften machen CHD8 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der chromatinvermittelten Kontrolle der Linienspezifizierung und der transkriptionellen Homöostase.

Das CHD8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Chd8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Chd8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Chd8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CHD8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Chd8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CHD8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Chd8-Exone abzielen, die für die CHD8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Chd8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CHD8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CHD8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Chd8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CHD8 HDR-Plasmid (m) und CHD8 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Chd8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Chd8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.