Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD6 (h): sc-413570

Présentation

CHD6 (chromodomain helicase DNA-binding protein 6) est un remodelleur de la chromatine dépendant de l’ATP de la famille CHD, qui associe la reconnaissance des marques histoniques au repositionnement des nucléosomes afin de réguler des programmes transcriptionnels. Il contribue à l’organisation de la chromatine et aux processus dépendants de l’ADN, en influençant l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II ainsi que les réponses cellulaires au stress, via la modulation de l’accessibilité de la chromatine. En façonnant les états épigénétiques, CHD6 affecte des voies qui contrôlent la différenciation, la prolifération et la stabilité du génome. Un remodelage de la chromatine dérégulé impliquant CHD6 a été associé à des réseaux transcriptionnels altérés observés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par un dysfonctionnement épigénétique, ce qui en fait une cible utile pour les études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHD6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHD6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHD6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHD6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHD6 pour l'étude de la signalisation de CHD6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CHD6 essentiels à la fonction de CHD6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHD6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CHD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHD6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHD6 plasmide HDR (h) et le CHD6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHD6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHD6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.