Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHCHD6 (m): sc-425817

Présentation

Chchd6 code CHCHD6, une protéine à domaine « coiled-coil-helix-coiled-coil-helix » enrichie au niveau des mitochondries, où elle soutient l’organisation de la membrane mitochondriale interne et l’architecture des crêtes. CHCHD6 a été associée à des processus liés au système d’organisation des sites de contact mitochondriaux et des crêtes (MICOS), qui coordonnent la courbure membranaire, l’assemblage de la chaîne respiratoire et la dynamique mitochondriale. Par ces fonctions, CHCHD6 influence l’efficacité de la phosphorylation oxydative, l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène et la signalisation du stress mitochondrial, susceptibles d’affecter la survie cellulaire et les programmes de différenciation. La dérégulation de l’ultrastructure mitochondriale et de l’homéostasie bioénergétique est pertinente dans des modèles de neurodégénérescence, de dysfonctionnement cardiométabolique et d’autres troubles où l’intégrité mitochondriale constitue un critère expérimental clé.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHCHD6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chchd6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chchd6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chchd6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHCHD6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chchd6 pour l'étude de la signalisation de CHCHD6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chchd6 essentiels à la fonction de CHCHD6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chchd6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHCHD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CHCHD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chchd6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHCHD6 plasmide HDR (m) et le CHCHD6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chchd6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chchd6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.