Plásmido CRISPR de Activación (h) CH25H: sc-402849-ACT

El CH25H humano codifica la colesterol 25-hidroxilasa, una enzima asociada al retículo endoplásmico que convierte el colesterol en 25-hidroxicolesterol, un oxiesterol que modula la homeostasis de los esteroles y la señalización de la inmunidad innata. La actividad de CH25H se integra con los programas de biosíntesis y transporte de colesterol, incluida la regulación metabólica impulsada por SREBP, e influye en el control posterior, mediado por lípidos, de la expresión génica inflamatoria. Como factor inducible por interferón en contextos mieloides y epiteliales, CH25H se ha vinculado a las interacciones huésped–patógeno y a la regulación de las respuestas de citocinas. La señalización desregulada de CH25H/25-hidroxicolesterol es relevante para estudios sobre inflamación metabólica, vías asociadas a la aterosclerosis y alteraciones inmunitarias observadas en infecciones y fenotipos similares a los autoinmunes.

CH25H El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CH25H sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CH25H El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CH25H en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CH25H, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CH25H. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CH25H y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CH25H en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CH25H en células tumorales con expresión de CH25H silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.