CGNL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405346-ACT

CGNL1 (cingulina-like 1) codifica uma proteína de suporte (scaffold) associada às junções apertadas (tight junctions), que se localiza nos contactos célula–célula de células epiteliais e endoteliais e ajuda a organizar a arquitetura juncional. Faz a ligação entre os complexos juncionais e o citoesqueleto de actina e participa na regulação da função de barreira, da polaridade e da montagem das junções através de vias que envolvem a sinalização de GTPases da família Rho e a remodelação do citoesqueleto. Ao influenciar a permeabilidade paracelular e a sinalização dependente de contacto, o CGNL1 é relevante para estudos de integridade tecidular, disrupção da barreira associada à inflamação e pistas do microambiente que moldam a migração celular. Alterações na regulação juncional e na dinâmica do citoesqueleto ligadas à biologia do CGNL1 são frequentemente analisadas em contextos como transições epitélio-mesenquimais, permeabilidade vascular e alterações de adesão associadas ao cancro.

CGNL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CGNL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CGNL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CGNL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CGNL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CGNL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CGNL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CGNL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CGNL1 em células tumorais com expressão de CGNL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.