ceruloplasmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401798

Übersicht

CP kodiert Ceruloplasmin, eine kupferbindende Multikupfer-Oxidase, die die Oxidation von Fe²⁺ zu Fe³⁺ katalysiert, um die Beladung von Transferrin und die systemische Eisenverteilung zu unterstützen. Es ist eine Schlüsselkomponente der Kupferhomöostase und der Ferroxidase-Aktivität und verknüpft hepatische Sekretion sowie extrazelluläre Redoxkontrolle mit dem Eisentransport und oxidativen Stressantworten. Die Ceruloplasmin-Funktion überschneidet sich mit Signalwegen, die den Eisenexport, das Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies und entzündliche Signalübertragung in Geweben mit hohem metabolischem Bedarf regulieren. Eine Fehlregulation der CP-Aktivität ist mit verändertem Eisenhandling und Phänotypen oxidativer Schädigung assoziiert, was CP zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Mechanismen macht, die für Neurodegeneration, Leberphysiologie und zelluläre Stressmodelle im Kontext von Anämie relevant sind.

Das ceruloplasmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ceruloplasmin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ceruloplasmin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CP-Exone abzielen, die für die ceruloplasmin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ceruloplasmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ceruloplasmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ceruloplasmin HDR-Plasmid (h) und ceruloplasmin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.