CEPT1 Double Nickase Plasmid (m): sc-430281-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CEPT1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CEPT1 Double-Nickase-Plasmid (m) und CEPT1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cept1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CEPT1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430281-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CEPT1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-430281-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Cept1** kodiert die Cholin/Ethanolamin-Phosphotransferase 1 (CEPT1), ein Membranenzyms des endoplasmatischen Retikulums, das den letzten Schritt des Kennedy‑Wegs katalysiert und dabei aus CDP‑Cholin bzw. CDP‑Ethanolamin und Diacylglycerol Phosphatidylcholin und Phosphatidylethanolamin bildet. Durch die Kontrolle zentraler Glycerophospholipid-Pools unterstützt CEPT1 die Membranbiogenese, die Homöostase von Organellen sowie lipidabhängige Signalprozesse, die Proliferation, Differenzierung und zelluläre Stressantworten beeinflussen. Störungen der Phospholipidbiosynthese und des -remodelings sind breit relevant für metabolische Dysfunktionen, die Neurobiologie und onkogene Zellzustandsübergänge, wodurch **Cept1** einen nützlichen Angriffspunkt darstellt, um lipidgetriebene Phänotypen in Säugerzellen zu untersuchen. Die CEPT1‑Funktion ist zudem mit Signalwegen verknüpft, die die Integrität des ER und seine sekretorische Kapazität steuern, und verbindet so die Lipidverfügbarkeit mit der Proteostase und dem Membrantransport.
CEPT1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cept1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cept1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cept1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cept1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.