Plasmide Double Nickase (h) Centrin-2: sc-400867-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Centrin-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Centrin-2 Double Nickase (h) et le plasmide Centrin-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CETN2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Centrin-2 Antibody (3F8): sc-293192
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Centrin-2 | sc-400867-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Centrin-2 | sc-400867-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CETN2 code la centrine‑2, une protéine conservée de liaison au calcium de type EF‑hand, localisée aux centrosomes et aux corps basaux, où elle soutient la duplication des centrioles, la cohésion du centrosome et l’organisation des microtubules associés aux cils. La centrine‑2 participe au contrôle, lié au cycle cellulaire, de la nucléation des microtubules et de l’assemblage du fuseau mitotique, et elle contribue à la stabilité du génome via l’homéostasie du centrosome et des interactions avec des facteurs impliqués dans la réparation de l’ADN. La perturbation de l’intégrité du centrosome et des voies de ciliogenèse liées à la fonction des centrines est fréquemment associée à l’instabilité chromosomique et à des phénotypes prolifératifs pertinents pour la biologie du cancer. CETN2 est donc largement utilisé comme marqueur et nœud mécanistique dans les études portant sur la dynamique du centrosome, la fidélité de la division cellulaire et les processus cellulaires liés aux cils.
Centrin-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CETN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CETN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CETN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CETN2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.