Plasmide CRISPR/Cas9 KO Centaurin α1 (h): sc-407463

Présentation

ADAP1 code la centaurine α1, une protéine activatrice de la GTPase Arf (Arf GAP) dotée d’un domaine d’homologie à la pleckstrine, qui relie la signalisation des phosphoinositides au trafic membranaire et au remodelage du cytosquelette d’actine. En modulant des événements d’endocytose et de transport vésiculaire dépendants d’Arf, la centaurine α1 contribue à coordonner le recyclage des récepteurs et la propagation des signaux en aval des lipides produits par la PI3K. Cette protéine a été associée à la régulation de la migration cellulaire et de la dynamique d’adhésion, des processus essentiels à l’organisation tissulaire et à la réactivité cellulaire. Des altérations de l’activité d’ADAP1 ont été étudiées dans des contextes où un trafic et un contrôle du cytosquelette dérégulés contribuent à des phénotypes liés à la maladie, notamment un comportement invasif et une signalisation aberrante.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Centaurin α1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADAP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADAP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Centaurin α1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADAP1 pour l'étude de la signalisation de Centaurin α1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADAP1 essentiels à la fonction de Centaurin α1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADAP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Centaurin α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Centaurin α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADAP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Centaurin α1 plasmide HDR (h) et le Centaurin α1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADAP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADAP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.