Plásmido Doble Nickase (h) CEACAM5: sc-401219-NIC

CEACAM5 (molécula de adhesión celular relacionada con el antígeno carcinoembrionario 5, CD66e) es una glucoproteína de la superfamilia de las inmunoglobulinas anclada a GPI que media la adhesión célula–célula y participa en la organización epitelial y la arquitectura tisular. Influye en eventos de señalización vinculados a la polaridad celular, la diferenciación y el control del crecimiento dependiente del contacto, y puede modular las interacciones entre las células tumorales y el microambiente. CEACAM5 se estudia ampliamente como marcador de linaje epitelial y con frecuencia se encuentra desregulado en carcinomas gastrointestinales y de otros tipos, donde la expresión alterada se correlaciona con fenotipos de progresión tumoral. Su biología se entrecruza con vías que regulan la dinámica de adhesión, el reconocimiento inmunitario en superficies mucosas y los procesos de diseminación metastásica.

CEACAM5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CEACAM5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CEACAM5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CEACAM5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CEACAM5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.