CDKN2B/p15 INK4B Double Nickase Plasmid (h): sc-400570-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CDKN2B/p15 INK4B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CDKN2B/p15 INK4B Double-Nickase-Plasmid (h) und CDKN2B/p15 INK4B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDKN2B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CDKN2B/p15 INK4B: sc-271791
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CDKN2B/p15 INK4B Double Nickase Plasmid (h) | sc-400570-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDKN2B/p15 INK4B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400570-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN2B kodiert p15^INK4B, einen Inhibitor cyclinabhängiger Kinasen, der an CDK4/6 bindet, um die RB‑Phosphorylierung zu begrenzen und den G1/S‑Checkpoint durchzusetzen. Als zentraler Knotenpunkt der Zellzykluskontrolle integriert CDKN2B Signale aus antiproliferativen Signalwegen wie TGF‑β/SMAD sowie aus breiteren Seneszenzprogrammen, die eine unangemessene Proliferation begrenzen. Eine veränderte Regulation von CDKN2B – einschließlich Deletion, Promotormethylierung oder Störung des Lokus auf 9p21 – ist häufig mit dem Verlust der Wachstumskontrolle in verschiedensten Malignomen und mit Phänotypen verbunden, die auf aberrante Proliferation zurückgehen. Diese Biologie macht CDKN2B zu einem nützlichen Ziel, um die Durchsetzung von Checkpoints, die Umgehung der Seneszenz und Signalweg‑Interaktionen zu untersuchen, die in der CDK4/6–RB‑Signalübertragung zusammenlaufen.
CDKN2B/p15 INK4B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDKN2B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDKN2B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDKN2B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDKN2B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.