Plasmide CRISPR d'Activation (m) Cdk5: sc-419602-ACT

La kinase 5 dépendante des cyclines (Cdk5) est une sérine/thréonine kinase dirigée vers la proline qui, contrairement aux CDK du cycle cellulaire, est principalement activée dans les cellules post-mitotiques par association avec p35/p39 et régule le développement et la fonction neuronaux. Chez la souris, Cdk5 contrôle la dynamique du cytosquelette, le guidage axonal, le trafic des vésicules synaptiques et la signalisation dépendante de l’activité en phosphorylant des substrats qui modulent la stabilité des microtubules, l’endocytose et les réponses transcriptionnelles. Elle s’articule avec des voies régissant la signalisation calcique, les cascades de kinases et la protéostase, intégrant des signaux qui façonnent la morphologie neuronale et la plasticité des réseaux. Une activité de Cdk5 dérégulée a été associée à des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, la neuroinflammation et des phénotypes neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible fréquente des études sur les réponses neuronales au stress et les dysfonctionnements au niveau des circuits.

Cdk5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cdk5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cdk5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cdk5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cdk5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cdk5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cdk5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cdk5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cdk5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cdk5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.