Cdk3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400846-ACT

CDK3 codifica a quinase dependente de ciclina 3 (Cdk3), uma quinase de serina/treonina que contribui para o controle do ciclo celular ao se associar a ciclinas para regular as transições ao longo de G1 e a entrada na fase S. A Cdk3 tem sido relacionada a eventos de fosforilação que modulam programas transcricionais, incluindo a regulação da expressão gênica responsiva ao ciclo celular por meio de vias como a sinalização RB/E2F. Alterações na atividade ou na expressão de CDK3 podem afetar a proliferação e o controle de checkpoints, processos frequentemente perturbados no câncer e em outros estados hiperproliferativos. Por isso, CDK3 é comumente estudado no contexto da dinâmica do ciclo celular, de redes de sinalização oncogênica e da regulação transcricional.

Cdk3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdk3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdk3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdk3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdk3 em células tumorais com expressão de CDK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.