CDK11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405330-ACT

Humanes CDK19 kodiert eine Cyclin-abhängige Kinase, die als regulatorische Komponente des Mediator-assoziierten CDK-Moduls fungiert und reizabhängige Transkription mit der Zellzykluskontrolle koordiniert. Durch die Beeinflussung von Transkriptionsprogrammen der RNA-Polymerase II trägt CDK19 zur Regulation von Proliferation, Stresssignalgebung und Differenzierung über Signalwege bei, die mit MAPK und anderen wachstumsfaktor-antwortenden Netzwerken verbunden sind. Eine fehlregulierte CDK19-Aktivität und Mediator-Kinase-Signalgebung wurden mit transkriptionellem Rewiring in der Krebsbiologie sowie mit veränderten zellulären Antworten auf genotoxische und entzündliche Reize in Zusammenhang gebracht. Diese Eigenschaften machen Untersuchungen der CDK19/CDK11-Achse relevant, um kontextspezifische Kontrolle der Genexpression in humanen Zellen zu entschlüsseln.

CDK11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDK19-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CDK11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDK19-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDK19-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CDK11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDK19-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CDK11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CDK11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDK19-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.