Cdc6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400796

Descripción general

CDC6 codifica Cdc6, una ATPasa esencial que otorga licencia a los orígenes de replicación del ADN mediante el ensamblaje del complejo de prerreplicación junto con ORC, CDT1 y MCM2–7 durante la fase G1. La regulación estricta de CDC6 a través de la actividad de CDK y la degradación mediada por ubiquitina coordina la transición G1/S y ayuda a garantizar los puntos de control del tiempo de replicación y la estabilidad del genoma. La expresión o el control desregulados de CDC6 pueden favorecer el estrés por re-replicación, la señalización de daño en el ADN y la inestabilidad cromosómica, características asociadas con frecuencia a la transformación oncogénica. Por ello, CDC6 se estudia ampliamente en el control del ciclo celular, las respuestas al estrés replicativo y los mecanismos que vinculan la concesión de licencia alterada de los orígenes con la inestabilidad genómica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cdc6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDC6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDC6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDC6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cdc6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDC6 para la investigación de la señalización de Cdc6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CDC6 críticos para la función de Cdc6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDC6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cdc6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cdc6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDC6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cdc6 (h) y el plásmido HDR Cdc6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDC6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDC6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.