Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cdc27 Double Nickase Plasmid (h): sc-400789-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cdc27 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cdc27 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cdc27 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDC27 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdc27: sc-9972
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cdc27 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400789-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc27 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400789-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CDC27-Gen kodiert Cdc27, eine zentrale Tetratricopeptid-Repeat-(TPR)-Untereinheit des Anaphase-Promoting-Complex/Cyclosome (APC/C), einer E3-Ubiquitin-Ligase, die die geordnete Proteolyse wichtiger mitotischer Regulatoren steuert. Durch Unterstützung der APC/C-Assemblierung und der Interaktionen mit Co-Aktivatoren trägt Cdc27 zu einem rechtzeitigen Übergang von der Metaphase zur Anaphase, zum Austritt aus der Mitose und zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität bei, indem es den regulierten Abbau von Cyclinen und Securin ermöglicht. Die Funktion von CDC27 ist daher eng mit dem Zellzyklus-Fortschritt, der Spindelkontrollpunkt-Signalgebung und der ubiquitinvermittelten Proteostase verknüpft. Eine veränderte APC/C-Aktivität und eine Dysregulation von CDC27 wurden mit chromosomaler Instabilität und proliferativen Phänotypen in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie und verwandten Zellzyklus-Erkrankungen untersucht werden.
Cdc27 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDC27-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDC27 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDC27-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDC27-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.