Plasmide Double Nickase (h) Cdc25C: sc-400833-NIC

CDC25C code pour Cdc25C, une phosphatase à double spécificité qui active le complexe CDK1–cycline B en retirant des phosphates inhibiteurs, favorisant la transition G2/M et l’entrée en mitose. Son activité est étroitement contrôlée par les signalisations des points de contrôle, notamment les voies ATR/CHK1 et celles liées à p53, qui freinent Cdc25C en cas de dommages à l’ADN et de stress de réplication afin de maintenir l’intégrité du génome. Une dérégulation de CDC25C peut perturber la synchronisation mitotique et contribuer à l’instabilité chromosomique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la dérégulation oncogénique du cycle cellulaire. Cdc25C interagit également avec la séquestration par les protéines 14-3-3 et une localisation dépendante de la phosphorylation, offrant des points d’entrée mécanistiques pour analyser l’adaptation aux points de contrôle et la régulation de la mitose.

Cdc25C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDC25C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDC25C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDC25C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDC25C.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.