Plásmido Doble Nickase (h) Cdc25B: sc-401457-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Cdc25B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Cdc25B (h) y el plásmido de doble nickasa Cdc25B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDC25B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdc25B Anticuerpo (DCS-162): sc-56266
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Cdc25B | sc-401457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Cdc25B | sc-401457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25B codifica la fosfatasa de doble especificidad Cdc25B, un activador clave de las quinasas dependientes de ciclinas que promueve la progresión del ciclo celular al eliminar fosfatos inhibidores de CDK1 y CDK2. Al coordinar la transición G2/M e integrar señales de control de puntos de control (checkpoints) aguas abajo de vías de señalización de daño en el ADN como ATM/ATR, Cdc25B contribuye a regular la entrada en mitosis y las respuestas al estrés replicativo. Su actividad está controlada por la localización dependiente de la fosforilación y por la estabilidad de la proteína, vinculándola a la señalización MAPK y a la degradación proteasomal. La expresión o actividad desregulada de CDC25B se asocia con proliferación aberrante, inestabilidad cromosómica y desregulación oncogénica del ciclo celular, lo que la convierte en un foco habitual en estudios de biología tumoral.
Cdc25B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDC25B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDC25B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDC25B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDC25B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.