Plasmide Double Nickase (h) Cdc25A: sc-400345-NIC

CDC25A code Cdc25A, une phosphatase à double spécificité qui active les kinases dépendantes des cyclines en retirant les phosphates inhibiteurs sur CDK2 et CDK1, favorisant ainsi la transition G1/S et la progression en phase S. Son activité est strictement contrôlée par les voies de signalisation des points de contrôle, notamment par la phosphorylation médiée par ATR/CHK1, qui déclenche une dégradation dépendante de l'ubiquitine en réponse au stress de réplication et aux dommages de l'ADN. Par ces mécanismes, Cdc25A coordonne la chronologie du cycle cellulaire avec la surveillance de l'intégrité du génome et interagit fonctionnellement avec des réseaux liés à p53 et à RB. Une expression ou une stabilité dérégulée de CDC25A est fréquemment associée à des phénotypes de prolifération aberrante et fait l'objet d'études dans le contexte de la signalisation oncogénique et de défauts des points de contrôle.

Cdc25A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDC25A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDC25A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDC25A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDC25A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.