Cdc20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400583

Übersicht

CDC20 kodiert Cdc20, einen essenziellen Koaktivator des anaphasefördernden Komplexes/Cyclosoms (APC/C), der den Übergang von der Metaphase zur Anaphase steuert, indem er den ubiquitinabhängigen Abbau zentraler mitotischer Regulatoren fördert. Seine Aktivität wird durch den Spindelaufbau-Checkpoint über inhibitorische Komplexe mit Proteinen wie MAD2 und BUBR1 reguliert, wodurch eine korrekte Chromosomensegregation und ein rechtzeitiger Austritt aus der Mitose sichergestellt werden. Eine Fehlregulation von CDC20 beeinträchtigt die Zuverlässigkeit des Checkpoints, fördert chromosomale Instabilität und Aneuploidie und ist in der Krebsbiologie häufig mit proliferativen Phänotypen verknüpft. Als zentraler Knotenpunkt der Zellzyklussteuerung wird Cdc20 häufig in Signalwegen untersucht, die APC/C-Signaling, Ubiquitin–Proteasom-Dynamik und die Kontrolle des mitotischen Checkpoints betreffen.

Das Cdc20 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDC20-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDC20-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDC20 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cdc20-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDC20-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cdc20-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDC20-Exone abzielen, die für die Cdc20-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDC20-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cdc20 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cdc20 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDC20-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cdc20 HDR-Plasmid (h) und Cdc20 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDC20-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDC20-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.