Plásmido Doble Nickase (h) Cdc2 p34: sc-400181-NIC

CDK1 codifica la quinasa de serina/treonina Cdc2 p34, la subunidad catalítica central del factor promotor de la fase M que impulsa la transición G2/M y la progresión mitótica. La actividad de CDK1 se coordina mediante la unión a ciclinas, la fosforilación activadora por la quinasa activadora de CDK y el control inhibidor por WEE1/MYT1 y las fosfatasas CDC25, conectando la señalización de los puntos de control con la segregación ordenada de los cromosomas. Como nodo central de la circuitería del ciclo celular, CDK1 se cruza con las vías de respuesta al daño del ADN y al estrés replicativo para regular la entrada en mitosis, el ensamblaje del huso y la citocinesis. La señalización desregulada de CDK1 y el control alterado de los puntos de control se observan con frecuencia en trastornos proliferativos y proporcionan una base mecanística para estudiar la inestabilidad genómica y la dependencia del ciclo celular en modelos de células humanas.

Cdc2 p34 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.