CD8-β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419577
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CD8-β O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CD8-β, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CD8-β Anticorpo (H35-17.2): sc-20041
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CD8-β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419577 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Cd8b1 codifica o CD8-β, uma glicoproteína transmembrana do tipo I que se associa ao CD8-α para formar o correceptor CD8 em linfócitos T citotóxicos e em um subconjunto de células dendríticas. Ao se ligar ao MHC de classe I e recrutar a quinase LCK da família Src, o CD8-β ajuda a ajustar a intensidade da sinalização do receptor de células T (TCR), a formação da sinapse imunológica e as cascatas de fosforilação a jusante que regulam ativação, proliferação e diferenciação efetora. A expressão de CD8-β influencia a seleção tímica e a manutenção periférica de células T CD8+, afetando a imunidade e a tolerância específicas a antígenos. A função alterada do correceptor CD8 é relevante para a desregulação imune e para modelos de infecção, inflamação e imunologia tumoral, nos quais as respostas de células T CD8+ moldam os fenótipos da doença.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CD8-β (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cd8b1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cd8b1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cd8b1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CD8-β.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cd8b1 para a investigação da sinalização de CD8-β, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cd8b1 críticos para a função CD8-β
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cd8b1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CD8-β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CD8-β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cd8b1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CD8-β Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CD8-β (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cd8b1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cd8b1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.