CD8-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419577

Übersicht

Cd8b1 kodiert CD8-β, ein Typ‑I‑Transmembran-Glykoprotein, das mit CD8-α dimerisiert und so den CD8‑Korezeptor auf zytotoxischen T‑Lymphozyten sowie auf einer Untergruppe dendritischer Zellen bildet. Durch Bindung an MHC‑Klasse‑I und Rekrutierung der Src‑Familienkinase LCK trägt CD8-β dazu bei, die Stärke der T‑Zellrezeptor-Signalübertragung, die Bildung der immunologischen Synapse und nachgeschaltete Phosphorylierungskaskaden zu modulieren, die Aktivierung, Proliferation und Effektor-Differenzierung steuern. Die Expression von CD8-β beeinflusst die thymische Selektion und die Aufrechterhaltung peripherer CD8+‑T‑Zellen und wirkt sich damit auf antigenspezifische Immunität und Toleranz aus. Eine veränderte Funktion des CD8‑Korezeptors ist relevant für Immunfehlregulation und für Modelle von Infektion, Entzündung und Tumorimmunologie, in denen CD8+‑T‑Zellantworten die Krankheitsphänotypen prägen.

Das CD8-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd8b1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd8b1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd8b1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD8-β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd8b1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD8-β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd8b1-Exone abzielen, die für die CD8-β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd8b1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD8-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD8-β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd8b1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD8-β HDR-Plasmid (m) und CD8-β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd8b1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd8b1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.