Partículas Lentivirales de Activación (h) CD73: sc-400307-LAC

El gen humano **NT5E** codifica **CD73**, una ecto-5′-nucleotidasa anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que desfosforila el AMP extracelular para producir adenosina, modelando así la señalización purinérgica y la homeostasis de nucleótidos en la superficie celular. La adenosina generada por CD73 activa vías de receptores de adenosina para regular la señalización dependiente de AMPc, la activación de células inmunitarias, la función de barrera endotelial y el tono vascular, y colabora funcionalmente con ectonucleotidasas situadas aguas arriba, como CD39, en el catabolismo de ATP/ADP. La actividad de NT5E/CD73 se examina con frecuencia en el contexto de la remodelación del entorno extracelular de nucleótidos asociada a hipoxia e inflamación, donde los cambios en la disponibilidad de adenosina pueden alterar el tráfico leucocitario y las interacciones con el estroma. La expresión desregulada de NT5E se ha vinculado a fenotipos inmunorreguladores en microambientes tumorales y a la patobiología vascular e inflamatoria, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de respuestas tisulares al estrés.

Las partículas de activación lentiviral CD73 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NT5E en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CD73 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NT5E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CD73. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NT5E y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.