CD73 Double Nickase Plasmid (h): sc-400307-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD73 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD73 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD73 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NT5E abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD73: sc-398260
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD73 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400307-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD73 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400307-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane NT5E kodiert CD73 (Ecto-5′-Nukleotidase), ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Oberflächenenzym, das extrazelluläres AMP zu Adenosin hydrolysiert und damit die purinerge Signalübertragung sowie das Nukleotidgleichgewicht im perizellulären Raum mitprägt. Durch die Regulation der Adenosinakkumulation beeinflusst CD73 GPCR-vermittelte cAMP-Signalwege, die Endothelbarrierefunktion, die Leukozytenmigration und hypoxieabhängige Programme, die mit metabolischer Anpassung und inflammatorischer Signalgebung verknüpft sind. Die CD73-Aktivität trägt zur Modulation von Thrombozyten- und Gefäßreaktionen bei und kann in unterschiedlichen Gewebekontexten die epithelial-mesenchymale Transition, das stromale Remodeling und die Polarisation von Immunzellen beeinflussen. Eine dysregulierte NT5E/CD73-Expression oder -Enzymaktivität wurde mit veränderter Immunregulation, Phänotypen der Gefäßverkalkung und der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zu Entzündung, Fibrose und krebsassoziierten Signalwegen stützt.
CD73 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NT5E-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NT5E abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NT5E-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NT5E-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.