Plasmide Double Nickase (h) CD73: sc-400307-NIC

Le gène humain **NT5E** code **CD73** (ecto-5′-nucléotidase), une enzyme de surface ancrée par un glycosylphosphatidylinositol qui hydrolyse l'AMP extracellulaire en adénosine, modelant ainsi la signalisation purinergique et l'équilibre des nucléotides dans l'espace péricellulaire. En régulant l'accumulation d'adénosine, CD73 influence la signalisation de l'AMPc médiée par les GPCR, la fonction de barrière endothéliale, le trafic leucocytaire et des programmes sensibles à l'hypoxie qui recoupent l'adaptation métabolique et la signalisation inflammatoire. L'activité de CD73 contribue à la modulation des réponses plaquettaires et vasculaires et peut affecter la transition épithélio-mésenchymateuse, le remodelage stromal et la polarisation des cellules immunitaires dans divers contextes tissulaires. Une expression ou une activité enzymatique dérégulée de NT5E/CD73 a été associée à une régulation immunitaire altérée, à des phénotypes de calcification vasculaire et à la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent dans l'étude des voies liées à l'inflammation, à la fibrose et au cancer.

CD73 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NT5E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NT5E. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NT5E. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NT5E.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.