Particules Lentivirales d'Activation (h2) CD69: sc-416315-LAC-2

Le gène humain CD69 code la protéine CD69, un récepteur lectine de type C transmembranaire de type II rapidement induit à la surface des lymphocytes T, des lymphocytes B, des cellules NK et d’autres leucocytes activés, où il sert de marqueur précoce d’activation et de modulateur de la signalisation immunitaire. CD69 influence le trafic des lymphocytes et leur rétention dans les tissus en régulant le récepteur 1 de la sphingosine-1-phosphate (S1PR1) et contribue à des programmes en aval qui affectent la production de cytokines, la prolifération et la dynamique de la synapse immunologique. Par ses rôles dans l’activation immunitaire, l’immunité des muqueuses et des cellules résidentes des tissus, ainsi que les réseaux de signalisation inflammatoire, CD69 est impliqué dans la dérégulation immunitaire observée dans l’auto-immunité, l’inflammation chronique, les infections et les microenvironnements immunitaires tumoraux. L’édition génomique ou la perturbation fonctionnelle de CD69 dans des cellules humaines soutient des études mécanistiques des circuits transcriptionnels dépendants de l’activation, du contrôle de la migration et de la sortie des tissus, ainsi que du phénotypage des cellules immunitaires dans des modèles de recherche in vitro et ex vivo.

Les particules d'activation lentivirales CD69 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CD69 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD69 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CD69, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD69. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CD69 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.