CD63 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419564

Panoramica

Cd63 codifica CD63, una tetraspanina arricchita su endosomi tardivi, lisosomi e vescicole extracellulari, dove organizza microdomini arricchiti in tetraspanine e coordina il traffico delle proteine di membrana. CD63 partecipa alla maturazione endosomiale, alla biogenesi dei corpi multivescicolari, allo smistamento del carico degli esosomi e alla regolazione del turnover dei recettori, influenzando processi quali adesione cellulare, migrazione e segnalazione delle cellule immunitarie. Attraverso interazioni con integrine e altre tetraspanine, CD63 incide sulle vie di trasporto vescicolare che modellano la presentazione dell’antigene e la comunicazione intercellulare. Un’espressione o una localizzazione alterata di CD63 è frequentemente utilizzata come indicatore in biologia del cancro, infiammazione e modelli di malattie infettive, per la sua stretta associazione con la dinamica delle vescicole e con la segnalazione nel microambiente tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD63 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd63 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd63 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd63 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD63.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd63 per lo studio della segnalazione di CD63, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd63 critici per la funzione di CD63
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd63 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD63 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD63 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd63. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD63 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD63 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd63 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd63 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.