Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CD59 Double Nickase Plasmid (h): sc-417670-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD59 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD59 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD59 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD59 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD59: sc-133170
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD59 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417670-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD59 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417670-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD59 (Protectin) ist ein glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankerter Membranregulator des Komplementsystems, der die Assemblierung des terminalen Membranangriffskomplexes (C5b-9) auf Wirtszellen hemmt. Indem CD59 komplementvermittelte Zytolyse begrenzt und Kollateralschäden an benachbarten Zellen reduziert, trägt es zur Aufrechterhaltung der Immunhomöostase an der Zelloberfläche bei und beeinflusst inflammatorische Signalwege in vaskulären, hämatopoetischen und epithelialen Kompartimenten. Eine veränderte Expression oder Funktion von CD59 ist mit einer dysregulierten Komplementaktivierung verbunden und trägt zu Krankheitsmechanismen bei, die Hämolyse, Neuroinflammation und Gewebeschädigung in komplementgetriebener Pathologie umfassen. Als weit verbreitetes Oberflächenprotein wird CD59 außerdem genutzt, um die Biologie von Membranmikrodomänen, Immunfluchtmechanismen und das Zusammenspiel zwischen angeborener Immunität und zellulären Überlebensprogrammen zu untersuchen.
CD59 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD59-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD59 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD59-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD59-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.