Plasmide Double Nickase (h) CD59: sc-417670-NIC

CD59 (protectine) est un régulateur membranaire du complément ancré par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui inhibe l’assemblage du complexe terminal d’attaque membranaire (C5b-9) sur les cellules de l’hôte. En limitant la cytolyse médiée par le complément et les lésions collatérales, CD59 contribue au maintien de l’homéostasie immunitaire à la surface cellulaire et module la signalisation inflammatoire dans les compartiments vasculaire, hématopoïétique et épithélial. Une expression ou une fonction altérée de CD59 est associée à une activation dérégulée du complément et participe à des mécanismes pathologiques impliquant l’hémolyse, la neuroinflammation et des lésions tissulaires dans les pathologies dépendantes du complément. Protéine de surface largement exprimée, CD59 sert aussi de modèle pour étudier la biologie des microdomaines membranaires, l’échappement immunitaire et les interactions entre l’immunité innée et les programmes de survie cellulaire.

CD59 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD59 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD59. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD59. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD59.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.