Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD57: sc-402750-ACT

B3GAT1, couramment associé à l’épitope glucidique CD57 (HNK-1), code une β‑1,3‑glucuronyltransférase qui contribue à la biosynthèse des structures glycanes HNK‑1 sur les glycoprotéines et glycolipides de surface cellulaire. Ce programme de glycosylation soutient la reconnaissance, l’adhésion et la signalisation entre cellules dans des contextes neurodéveloppementaux et immunitaires, en influençant des processus tels que la croissance des neurites, l’organisation synaptique et la différenciation des lymphocytes. Les glycannes associés à CD57/HNK‑1 sont largement utilisés comme marqueurs de sous-populations matures de cellules NK et T, et ont été reliés à un remodelage altéré des glycannes dans des phénotypes neurologiques et inflammatoires. Une glycosylation dépendante de B3GAT1 dérégulée peut perturber les interactions avec la matrice extracellulaire et les voies de signalisation des récepteurs qui reposent sur une organisation précise des motifs glycanes.

CD57 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de B3GAT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD57 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus B3GAT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription B3GAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD57. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus B3GAT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD57 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD57 dans les cellules tumorales présentant une expression de B3GAT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.