Plasmide Double Nickase (h) CD46: sc-400968-NIC

CD46 (protéine cofacteur membranaire) est une glycoprotéine régulatrice du complément exprimée de manière ubiquitaire, qui protège les cellules de l’hôte d’une attaque du complément autologue en servant de cofacteur à la dégradation de C3b et de C4b médiée par le facteur I, atténuant ainsi l’amplification des voies classique et alterne. Par ses fonctions à la surface cellulaire, CD46 module la signalisation de l’immunité innée, le tonus inflammatoire et les interactions cellule–cellule, et est impliquée dans des processus tels que l’activation des leucocytes et la biologie de la barrière épithéliale. Des altérations de la fonction ou de l’expression de CD46 ont été associées à des pathophysiologies dues au complément, notamment le syndrome hémolytique et urémique atypique et d’autres affections inflammatoires immunomédiées. CD46 sert également de récepteur à certains agents pathogènes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des interactions hôte–microbe et des mécanismes d’échappement immunitaire.

CD46 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD46 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD46. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD46. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD46.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.