CD40 Double Nickase Plasmid (m): sc-423444-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD40 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD40 Double-Nickase-Plasmid (m) und CD40 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cd40 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD40: sc-20010
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD40 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423444-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Cd40-Gen kodiert CD40, ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das auf antigenpräsentierenden Zellen und weiteren Immunzell-Subtypen exprimiert wird und dort über kostimulatorische Signale mit CD40L die adaptiven Immunantworten koordiniert. Die CD40-Signalübertragung rekrutiert TRAF-Adapterproteine und aktiviert die kanonischen und nichtkanonischen NF-κB-, MAPK- und PI3K-Signalwege, was die Zytokinproduktion, Programme der Antigenpräsentation und Entscheidungen über das Zellüberleben steuert. In B-Zellen trägt CD40 zur Keimzentrumsbildung, zum Klassenwechsel (Class-Switch-Rekombination) und zur Affinitätsreifung bei, während es in myeloiden Zellen die entzündliche Aktivierung sowie die Interaktion mit T-Zellen moduliert. Eine fehlregulierte Aktivität der CD40-Achse wird mit Autoimmun- und chronisch-entzündlichen Phänotypen, transplantationsassoziierten Immunreaktionen und der Umgestaltung des Tumor-Immunsmikromilieus in Verbindung gebracht, weshalb sie ein häufiges Ziel mechanistischer immunologischer Studien ist.
CD40 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cd40-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cd40 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cd40-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cd40-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.