CD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419557

Übersicht

Cd4 kodiert CD4, ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein, das überwiegend auf T-Helferzellen und einer Untergruppe von Thymozyten exprimiert wird. Dort dient es als Korezeptor, der die TCR-Erkennung von MHC-Klasse II stabilisiert und Lck-abhängige Signalübertragung fördert. Über seine Assoziation mit dem TCR-Komplex trägt CD4 zur thymischen Selektion, zu Aktivierungsschwellen von T-Zellen und zu nachgeschalteten Signalwegen bei, die die Differenzierung in Effektor- und regulatorische Linien prägen. Veränderte CD4-abhängige Signalgebung und die Homöostase von CD4+-T-Zellen stehen im Zentrum von Immundysregulation in autoimmunen und entzündlichen Kontexten; zudem sind Veränderungen der CD4+-T-Zellfunktion auch für die Tumorimmunologie sowie für Wirt–Pathogen-Interaktionen relevant. In Mausmodellen werden Cd4-Störungen häufig eingesetzt, um Antigenpräsentation, zytokingesteuerte Polarisierung und das Verhalten adaptiver Immunnetzwerke in vivo und in vitro zu untersuchen.

Das CD4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd4-Exone abzielen, die für die CD4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD4 HDR-Plasmid (m) und CD4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.