Particules Lentivirales d'Activation (m) CD39: sc-419549-LAC

Entpd1 code pour l’ectonucléotidase CD39 (ENTPD1), une enzyme de surface cellulaire qui hydrolyse l’ATP et l’ADP extracellulaires en AMP, modulant ainsi la signalisation purinergique dans les compartiments vasculaire, immunitaire et stromal chez la souris. En régulant la disponibilité des nucléotides, CD39 influence la signalisation inflammatoire, les réponses des plaquettes et de l’endothélium, ainsi que l’équilibre entre les signaux de danger portés par l’ATP et les voies immunorégulatrices générant de l’adénosine en collaboration avec CD73. L’activité de CD39 est associée à la modulation de l’activation des leucocytes, de la production de cytokines et des réponses aux lésions tissulaires, faisant d’Entpd1 une cible pertinente dans des modèles d’inflammation, de thrombose, de lésion d’ischémie-reperfusion et de régulation immunitaire associée aux tumeurs. Son expression est couramment étudiée sur les lymphocytes T régulateurs, les populations myéloïdes et l’endothélium, où le métabolisme des nucléotides extracellulaires contrôle la communication intercellulaire.

Les particules d'activation lentivirales CD39 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Entpd1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD39 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Entpd1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD39. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Entpd1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.