CD37 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419547-ACT

O gene Cd37 de camundongo codifica a CD37, uma tetraspanina amplamente expressa em células B e em outros subtipos de leucócitos, que organiza microdomínios de membrana e modula a sinalização mediada por receptores. A CD37 participa da regulação da intensidade da sinalização do receptor de células B, da formação da sinapse imune e da adesão e migração dependentes de integrinas, influenciando vias a jusante ligadas a respostas a citocinas e à ativação de linfócitos. Por meio de suas funções de ancoragem/andaime (scaffolding), a CD37 contribui para o controle da apresentação de antígenos e da comunicação celular em tecidos linfoides. A expressão ou a sinalização desregulada de CD37 tem sido associada a alterações da função imune humoral e da homeostase de linfócitos, tornando Cd37 um alvo útil para estudos mecanísticos em imunologia e em modelos de doenças hematológicas.

CD37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd37 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd37 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd37, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD37. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd37 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD37 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD37 em células tumorais com expressão de Cd37 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.