Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD36: sc-400233-ACT

Le gène humain **CD36** code un récepteur « scavenger » multifonctionnel qui médie l’absorption des acides gras à longue chaîne et des lipoprotéines oxydées, en coordonnant la gestion des lipides avec l’état métabolique de la cellule. CD36 participe aux programmes de transport et de stockage des lipides et s’interface avec la signalisation inflammatoire, notamment dans des processus liés à l’activation des macrophages et à la formation de cellules spumeuses. Par ses rôles dans la biologie des cellules endothéliales, des adipocytes et des cellules immunitaires, CD36 est fréquemment étudié dans les voies impliquées dans l’athérosclérose, les dysfonctions métaboliques et l’inflammation chronique. Une activité altérée de CD36 a également été étudiée dans le métabolisme des cellules cancéreuses et le microenvironnement tumoral, où l’utilisation des lipides peut influencer la croissance et les phénotypes immunitaires.

CD36 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD36 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD36 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD36 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD36, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD36. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD36 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD36 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD36 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD36 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.