Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD35 (h): sc-401210

Présentation

CR1 code pour CD35, un récepteur membranaire du complément qui se lie aux opsonines C3b/C4b et favorise l’élimination des complexes immuns tout en régulant l’activation du complément à la surface des cellules. CD35 participe à la reconnaissance immunitaire innée et fait le lien entre le complément et les réponses adaptatives en modulant la prise en charge des antigènes et la signalisation des lymphocytes B ; il est exprimé sur les érythrocytes, les leucocytes et les cellules dendritiques folliculaires. En contrôlant l’amplification de la cascade du complément et la capture phagocytaire, CR1 influence l’homéostasie inflammatoire et la susceptibilité aux lésions tissulaires médiées par le complément. Des variations génétiques et une expression altérée de CR1/CD35 ont été associées à une dérégulation immunitaire et à des troubles inflammatoires, et ont également été étudiées dans des contextes tels que la neuroinflammation et les interactions hôte–pathogène lors des maladies infectieuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD35 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD35.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CR1 pour l'étude de la signalisation de CD35, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CR1 essentiels à la fonction de CD35
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD35 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD35 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD35 plasmide HDR (h) et le CD35 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.