Plasmide Double Nickase (h) CD33: sc-401011-NIC

CD33 (Siglec-3) est une lectine de type immunoglobuline se liant à l’acide sialique, exprimée principalement à la surface des cellules de la lignée myéloïde, où elle agit comme récepteur inhibiteur en atténuant l’activation immunitaire. Via la signalisation dépendante du motif inhibiteur à base de tyrosine des immunorécepteurs (ITIM) et le recrutement de phosphatases telles que SHP-1/2, CD33 module les voies en aval qui contrôlent la production de cytokines, la phagocytose et les seuils d’activation cellulaire. CD33 participe à la régulation de l’homéostasie de l’immunité innée et des réponses microgliales, reliant la reconnaissance des glycannes à des programmes de signalisation inhibitrice. Une expression ou une fonction altérée de CD33 a été impliquée dans les hémopathies malignes myéloïdes et les processus neuro-inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et des phénotypes myéloïdes associés aux maladies.

CD33 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD33 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD33. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD33. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD33.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.