Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD33: sc-401011-ACT

Le CD33 humain code une lectine de type immunoglobuline se liant à l’acide sialique (Siglec-3), exprimée principalement sur les cellules de la lignée myéloïde, où elle agit comme un récepteur inhibiteur atténuant l’activation cellulaire. Via la signalisation par motif inhibiteur à base de tyrosine des immunorécepteurs (ITIM) et le recrutement de phosphatases telles que SHP-1/2, CD33 module les seuils de l’immunité innée, les réponses cytokiniques et les programmes de phagocytose. CD33 participe à la reconnaissance des glycannes sialylés et influence des voies régissant la différenciation myéloïde, le traitement des antigènes et la signalisation inflammatoire. Des altérations de l’expression et de la signalisation de CD33 ont été associées à des hémopathies malignes myéloïdes et à des contextes de neuro-inflammation, ce qui en fait un marqueur et un nœud mécanistique importants pour la recherche en biologie hématopoïétique et immunitaire.

CD33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD33 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD33 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD33, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD33. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD33 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD33 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD33 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD33 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.