Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD30: sc-402068-ACT

TNFRSF8 code pour CD30, un membre de la superfamille des récepteurs du TNF exprimé sur les lymphocytes activés et impliqué dans la régulation de l’activation, de la prolifération et de la survie cellulaires. La signalisation via CD30 recrute des protéines adaptatrices afin de moduler l’activité des voies NF-κB et MAPK, façonnant des programmes transcriptionnels associés aux réponses immunitaires et au stress cellulaire. Une expression et une signalisation de CD30 dérégulées sont étudiées dans le contexte des hémopathies malignes lymphoïdes et des microenvironnements inflammatoires, où des signaux altérés médiés par le récepteur peuvent influencer les états de croissance et de différenciation. En tant que récepteur de surface à expression inductible, CD30 constitue une cible accessible pour disséquer la régulation transcriptionnelle induite par les récepteurs et le remodelage des réseaux en aval dans les cellules humaines.

CD30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFRSF8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFRSF8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFRSF8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD30. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFRSF8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD30 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD30 dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFRSF8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.