Plásmido CRISPR de Activación (h) CD3-γ: sc-402537-ACT

CD3G codifica CD3-γ, un componente esencial del complejo receptor de células T (TCR)-CD3 que acopla el reconocimiento de antígenos con la transducción de señales intracelulares. Mediante su ensamblaje con CD3δ, CD3ε y CD3ζ, CD3-γ contribuye a iniciar cascadas de señalización dependientes de fosforilación que involucran a LCK, ZAP70 y, aguas abajo, las vías MAPK, NF-κB y NFAT, las cuales regulan la activación de las células T, su proliferación y la producción de citocinas. La alteración de la expresión o la función de CD3G puede perturbar el desarrollo de los timocitos y los umbrales de señalización del TCR, lo que vincula a este gen con fenotipos de desregulación inmunitaria y mecanismos relacionados con la inmunodeficiencia. Como subunidad central del complejo TCR, CD3-γ se estudia ampliamente en biología de linfocitos, señalización inmunitaria adaptativa y el “cross-talk” entre vías que modula las respuestas a estímulos inflamatorios.

CD3-γ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD3G sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD3-γ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD3G en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD3G, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD3-γ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD3G y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD3-γ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD3-γ en células tumorales con expresión de CD3G silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.