Plásmido CRISPR de Activación (h) CD27L: sc-402625-ACT

El CD70 humano (CD27L) es un miembro transmembrana de tipo II de la superfamilia de ligandos del TNF, expresado principalmente en células presentadoras de antígeno activadas y en subpoblaciones de linfocitos. Al unirse a CD27 en células T, células B y células NK, CD70 favorece señales coestimuladoras que modulan la expansión clonal, la supervivencia y la diferenciación, influyendo en las respuestas del centro germinal y en la memoria inmunológica. Este eje se integra con programas transcripcionales ligados a NF-κB y MAPK aguas abajo de la señalización de la familia TNFR, y contribuye a la producción de citocinas y a la función efectora citotóxica. La expresión desregulada de CD70 se ha asociado con una activación inmunitaria alterada y con fenotipos de evasión inmunitaria en múltiples contextos de investigación inflamatoria y oncológica, lo que lo hace relevante para estudios de inmunología tumoral y de homeostasis inmunitaria.

CD27L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD70 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD27L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD70 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD70, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD27L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD70 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD27L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD27L en células tumorales con expresión de CD70 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.