CD24 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418762-ACT

CD24 codifica uma proteína de superfície celular ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) e altamente glicosilada, que modula interações célula–célula e célula–matriz e influencia a sinalização imune. CD24 participa de processos como ativação de linfócitos, dinâmicas de adesão e regulação de respostas inflamatórias por meio de interações com lectinas do tipo imunoglobulina que se ligam ao ácido siálico, afetando checkpoints da imunidade inata e programas de sinalização a jusante. Sua expressão é regulada ao longo do desenvolvimento e frequentemente associada a estados de linhagem epitelial e hematopoética, o que a torna um marcador útil de diferenciação celular e heterogeneidade fenotípica. Alterações nos níveis de CD24 têm sido associadas a contextos de desregulação imune e biologia tumoral, dando suporte a estudos mecanísticos sobre evasão imune, características associadas à metástase e comunicação com o microambiente em sistemas modelo.

CD24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD24 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD24 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD24, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD24. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD24 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD24 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD24 em células tumorais com expressão de CD24 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.