Plasmide CRISPR d'Activation (m) CD22: sc-419539-ACT

Le gène murin Cd22 code CD22, une lectine de type Ig se liant à l’acide sialique, spécifique des lymphocytes B, qui fonctionne comme corécepteur inhibiteur du récepteur de l’antigène des lymphocytes B (BCR). Grâce à ses motifs ITIM cytoplasmiques, CD22 recrute des phosphatases telles que SHP-1 afin d’atténuer la signalisation proximale du BCR, modulant les flux calciques, l’activité des MAPK et les programmes transcriptionnels en aval qui déterminent les seuils d’activation et la tolérance. CD22 contribue également à l’adhérence et au trafic des lymphocytes B en reconnaissant des glycannes sialylés liés en α2,6, influençant les interactions au sein des microenvironnements lymphoïdes. Une signalisation et une expression dérégulées de CD22 sont associées à des réponses humorales altérées et à des phénotypes de tolérance immunitaire, ce qui souligne sa pertinence dans l’étude de la dysrégulation des lymphocytes B et des mécanismes liés à l’auto-immunité.

CD22 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cd22 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD22 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cd22 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cd22, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD22. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cd22 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD22 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD22 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cd22 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.