Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD1C: sc-403813-ACT

CD1C (molécule CD1c) est une glycoprotéine de présentation de l’antigène non classique, apparentée aux molécules du CMH de classe I, exprimée principalement par certains sous-types de cellules dendritiques et par certaines cellules B. Elle se lie à des antigènes lipidiques et glycolipidiques et les présente aux lymphocytes T. En assurant la présentation de ligands lipidiques d’origine microbienne ou endogène, CD1C contribue à l’initiation et à l’orientation des réponses immunitaires adaptatives et influence la polarisation des cytokines dans le cadre des voies de traitement et de présentation de l’antigène. Les cellules dendritiques CD1C-positives participent à la détection des agents pathogènes et au dialogue avec les programmes de l’immunité innée, reliant la disponibilité des antigènes lipidiques à l’activation des lymphocytes T et à l’homéostasie immunitaire. Des altérations de l’expression de CD1C ou une reconnaissance immunitaire restreinte à CD1c ont été étudiées dans des affections inflammatoires et auto-immunes, les réponses aux maladies infectieuses, ainsi que le remodelage immunitaire associé aux tumeurs.

CD1C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD1C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD1C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD1C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD1C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD1C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD1C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD1C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD1C dans les cellules tumorales présentant une expression de CD1C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.